微生物實驗室中的分注操作技術掌握

為何分注技術在微生物學中至關重要

即使只有1至2微升的分注誤差，也可能對菌落形成單位（CFU）計數、最低抑菌濃度（MIC）結果或聚合酶鏈反應（PCR）效率造成顯著影響。抗生素敏感性測試、系列稀釋以及培養基準備等實驗均依賴準確的分注操作。此外，微生物學中極為重要的污染控制，從無菌分注操作開始。

正向分注與反向分注技術比較

正向分注（Forward Pipetting）

• 為標準分注技術，適用於水溶液及大多數常見試劑。

• 常用於水、緩衝液、微生物懸浮液及一般微生物學試劑。

• 操作步驟：按壓活塞至第一段停止→吸取液體→按壓活塞至第二段停止排液。

反向分注（Reverse Pipetting）

• 適用於蛋白質溶液、甘油或揮發性試劑。

• 適合黏稠樣本、酶溶液或需要極高精準度的小體積操作。

• 操作步驟：按壓活塞至第二段停止→吸取比所需量更多的液體→排液至第一段停止（保留殘餘液體於吸頭中）。

防止分注誤差的關鍵技巧

• 預先潤濕吸頭：確保小體積轉移時的體積一致性。

• 吸液時保持分注器垂直，排液時傾斜約45度。

• 使用正確尺寸的吸頭，過大或過小均會造成誤差。

• 避免氣泡形成，氣泡會改變實際體積並污染樣品。

• 不同樣本間更換吸頭，防止交叉污染。

• 定期校正分注器，未校正的分注器比沒有分注器更具誤導性。